1. 实验试剂准备：见上述cAMP标准曲线测定
2. 实验细胞制备：实验细胞离心后弃掉培养基，用1x刺激缓冲液(含0.5mM IBMX 【注2】)重悬至合适细胞数, 384浅孔板每孔加5 μL细胞
3. 实验化合物用1x刺激缓冲液 (含0.5mM IBMX) 稀释至合适浓度，每孔加5 μL于步骤2的细胞板实验孔中，建议复孔
4. 阳性细胞对照孔：每孔加入5 μL 细胞和5 μL适当阳性化合物(例如Forskolin)，建议复孔，
5. 阴性细胞对照和无刺激细胞对照孔：每孔加入5 μL 细胞和5 μL 1x刺激缓冲液(含0.5mM IBMX) , 建议复孔
6. 根据实验要求对细胞进行适当温度和时间的刺激。具体刺激温度和时间需要优化，一般以37℃刺激30 min作为初始实验条件
7. 除阴性细胞对照孔外加入5 μL cAMP-DI, 阴性细胞对照孔加入5 μL裂解和检测缓冲液，振板10 sec 混匀
8. 加入5 μL Anti-cAMP-Eu，振板10 sec 混匀
9. 室温（22-25℃）孵育1 hr，用 配备HTRF检测模块的酶标仪进行检测， 激发光（Ex）为320 nm，检测 665 nm和620 nm 两个波长的发射光（Em）
10. 数据处理：以Em 665/Em 620比值F对样品浓度进行曲线拟合获取化合物EC50, EC10, EC90等参数。
