1. 待测细胞培养基样品准备
1) 从对数生长期的细胞培养中取1mL细胞培养基。
2) 细胞培养基室温离心 200g ,5分钟。将大约800μL培养基转到新的微管中,注意不要带入离下的细胞碎片。
3) 用以上准备的细胞培养基进行荧光素酶支原体检测。
2. 荧光素酶支原体检测
1) 取50μL细胞培养基样品加入96孔白色不透明细胞板。
2) 将荧光素酶支原体检测试剂和底物平衡到室温(22℃-25℃),轻摇混匀。
3) 加入50μL荧光素酶支原体检测试剂到50μL细胞培养基样品。
4) 振荡混匀10sec,室温孵育5min,读取荧光值(读数1)。
5) 加入10μL荧光素酶支原体检测底物。
6) 振荡混匀10sec,室温孵育10min, 读取荧光值(读数2)。
3. 结果
读数2和读数1的比值用来判断是否存在支原体污染。
读数2和读数1的比值
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结果解释和建议
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< 1
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无支原体污染
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1-1.2
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可能的支原体污染。隔离细胞,培养24-48hr后再次检测。
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> 1.2
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支原体污染
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