细胞活力检测有多种方法，如检测染料排除的，检测ATP产生的，检测酶对底物降价活性的等。荧光素酶检测法应用比较广泛，是基于活细胞产生ATP的能力的。由于是细胞检测，有时需要有内参对照，由此产生multiplex 分析需求，即对同一多种分析方法同时检测，相互不干扰，彼此检测机理不同，如此可以进行相关对比，从而排除实验因素外的数据差异。国外CellTiter Fluor （CTF）类产品就是基于这样的原理设计的。本公司自行研发推出了同类的荧光细胞活力检测试剂盒（Fluorescent Cell Viability Assay Kit, CTF-NBTM），性能上与国外品牌产品无明显差异。本产品是基于细胞蛋白酶对多肽产物的降价，产生荧光信号。细胞膜完整性受损时，该蛋白酶就失去了对底物的降价活性。CTF-NBTM与荧光素酶试剂盒检测原理不同，检测方法也不同，可以检测到更早期的轻微的细胞损害，两个检测相容性好，可以进行multiplex 检测。
·性能
检测信号，Window，灵敏度与特异性与国外品牌同类产品类似。
·相容性
与CTG等常用分析试剂相容，不形成相互影响。
·特征
对细胞早期膜损伤更敏感。
·便捷
“加入-混合—温育-检测”，整个实验步骤简单，易操作。
1. 细胞准备
1) 在96孔或384孔细胞培养板铺合适密度的待检测细胞。建议使用白板。
2) 准备待检化合物。将合适浓度的待检测化合物加到细胞板孔中。培养液中有机溶剂浓度保持在1～2%以下。设立未加化合物的对照组。根据项目需求继续培养合适的时间。
2. 细胞活力检测
1) 取出CTF-NBTM细胞活力检测试剂，在室温平衡20分钟。轻摇混匀。
2) 配制CTF反应液：CTF底物是100x的，用CTF缓冲液配成1x反应液，充分混匀，与待检测细胞等体积混合使用。
3) 取出待测细胞培养板，在室温平衡20分钟。
4) 向培养板孔内加入等体积的CTF反应液，轻摇20秒钟混匀，避光37 ℃ 反应60～90分钟。
5) 在读板仪上读取荧光信号，激发波长380nm，发射波长510nm。
6) 根据需要，继续进行下游的multiplex 分析。
Copyright © 2024 宁波友波生物科技有限公司 备案号： 浙ICP备2025149071号
