微分裂荧光素酶技术（Nano-luc split enzyme technology）将荧光素酶蛋白分子分成两个不同的片段，分别表达，两个片段具有高亲和力，在同一反应体系中可以快速自动生成具有荧光素酶活性的完整的酶分子。检测微分裂荧光素酶活性可以用于细胞内目标蛋白的表达水平，相互作用，动态变化等研究。微分裂荧光素酶细胞外检测试剂盒（NBA-GloTM HiBiT Extracellular Detection System）提供细胞非裂解缓冲液，反应底物，而反应体系的分裂荧光素酶小片段则克隆在表达载体上，并与目标蛋白表达在同一分子上，作为目标蛋白分子的标签，该目标蛋白是分泌型的或存在于细胞膜胞外。带分裂荧光素酶小片段标签的目标蛋白表达载体由用户构建，制备，并完成对细胞的转染。
·高稳定性
产品-20℃或以下储存3个月，-80℃或以下储存12个月荧光素酶保持 > 90%的活性。
·高信号强度
HEK293细胞转染分裂酶小片段标签质粒，0.2mg DNA每个96孔板反应孔，48小时后检测，荧光信号读值通常能到千万级。
·高灵敏度，反应窗口大
反应本底低，与转染细胞孔信号相差2-3个数量级。在低至100个细胞时，读数依然比对照高出3倍以上。
·适合于高通量检测
荧光信号半衰期较长，荧光强度在2小时内保持相对稳定，满足一次同时进行大批量的微孔板实验需求。
1. 在96孔或384孔细胞培养板铺合适密度的待检测细胞，转染合适质粒或带有分裂荧光素酶小片段标签的目标蛋白表达载体的稳定细胞株。建议使用白板。
2. 根据项目需求对细胞进行相关处理，并继续培养合适的时间。
3. 取出检测缓冲液，在室温平衡20分钟。快速spin 底物管10秒钟，将内容物收集于管底，放置在冰盒上。
4. 取出待测细胞培养板，在室温平衡20分钟。
5. 准备1x的检测工作液：根据实验需求确定配制的试剂量。配制时将需要的底物及分裂酶大片段（用户自供，使用浓度需优化）按量比加到缓冲液中，充分混匀。试剂盒中底物是100x，建议分裂酶大片段浓度为50x，使用前用缓冲液稀释成1x的检测工作液。注意避光。
6. 向待检反应孔里加入等体积的1x的检测工作液，轻轻振荡30秒钟。
7. 在luminescence读板仪上读取荧光信号。保存数据。进行数据处理分析。
8. 未使用完的试剂放回-20℃冰箱保存。
Copyright © 2024 宁波友波生物科技有限公司 备案号： 浙ICP备2025149071号
