NBA-Glo^TM激酶ADP检测试剂盒是宁波友波生物科技有限公司利用公司专有的技术开发而成，可以定量测定酶学实验中激酶的活性。该试剂盒通过定量检测激酶反应产物ADP的数量以确定激酶的活性： ADP的数量和激酶活性呈正相关。 使用NBA-Glo^TM激酶ADP检测试剂盒时激酶反应中的ATP浓度最高可至1mM。该试剂盒可以检测多数激酶，激酶底物包括多肽，蛋白，脂或糖等。该试剂盒可用于激酶抑制物的高通量均相筛选，并可以通过调整ATP浓度区分ATP竞争性和非竞争性抑制物。该试剂盒也可以用于检测 任何产生ADP的酶的活性，例如ATPase。该试剂具有信噪比高、重复性好、稳定性好的特点。均质即用型的配方减少了实验准备和操作步骤，降低了因为多次加样导致的误差，且其稳定的辉光信号使该产品尤其适合高通量的化合物筛选。

·ATP浓度从1μM到1mM 都可以用于实验，并且可以区分竞争性和非竞争性的激酶抑制剂。

·高灵敏度和更大的动态量程

低至0.25pmol的ADP可以被检测到。极高的灵敏度和更大的动态量程使得更少的激酶用量就可以满足实验需要，并且易于优化HTS实验条件。

·便捷的实验步骤

激酶反应后的均相检测使整个实验过程更为简单，更易操作，有利于开展HTS筛选实验。

·适合于高通量检测

荧光信号0.5-12hr内都可以检测，荧光强度保持稳定的线性关系，满足一次进行大批量实验板检测的需求。专有的试剂成分使该发光检测不易受化合物的干扰。

1. 激酶反应

1) 在96孔或384孔白不透明实验板中进行激酶反应。建议96孔板反应体积为25μL，384孔板反应体积为5μL。可以在激酶反应中加入浓度梯度的测试化合物。

2) 激酶反应的激酶和底物浓度需要根据不同的激酶进行优化。在实验所需的适当信噪比的情况下，可以采用在信号线性反应范围的激酶浓度进行实验。由于NBA-Glo^TM 激酶ADP检测试剂盒的高度灵敏性，激酶用量可以极大降低。

3) 重要提示：ATP的浓度最高可至1mM。一些市售ATP含有ADP残余，由于NBA-Glo^TM 激酶ADP检测试剂盒的高度灵敏性，ATP中的ADP残余会导致高实验背景，因此激酶反应需使用高纯度的 ATP，例如Sigma-Aldrich所售 ATP,  Cat# A2383 (纯度≥99%）或其他更高纯度的ATP。

4) 激酶反应可以在通用反应缓冲液中进行(40mM Tris-HCl (pH 7.5), 0.1 mg/ml BSA, 20mM MgCl₂)或采用文献报道的反应缓冲液和辅助因子。

5) 激酶反应的温度和时间需根据不同激酶而设定。进行化合物高通量筛选实验时，建议优化激酶反应于室温(22℃-25℃)进行，以利于在NBA-Glo^TM 激酶ADP检测，过程中保持实验板的温度均一性。

6) 激酶反应结束后不需要加入额外试剂终止激酶反应。如果因特殊实验要求需要加入激酶反应终止试剂，避免使用镁离子螯合剂，例如EDTA。NBA-Glo^TM 激酶ADP检测中需要镁离子进行反应。

2. 激酶反应后ATP的去除

1) 取出NBA-Glo^TM 激酶ATP 去除试剂，平衡至室温(22℃-25℃)。轻摇混匀。

2) 如果激酶反应是在非室温，例如30℃进行反应的，平衡实验板至室温。

3) 加25 µL的ATP去除试剂到 以上25 µL 96-孔实验板中(总体积50µL), 或5 µL ATP去除试剂到5 µL 384- 孔实验板中(总体积10µL)。振荡混匀。

4) 室温孵育40分钟。

3. 激酶活性测定（ADP检测）

1) 取出NBA-Glo^TM 激酶ADP检测试剂，平衡至室温。轻摇混匀。（提示： ADP检测试剂中的荧光素酶反应对温度变化敏感。试剂和实验板需要平衡到室温（22℃-25℃），测试过程温度保持恒定（±1℃））

2) 加50 µL的ADP检测试剂到 以上50 µL 96-孔实验板中, 或10 µL ADP检测试剂到以上10 µL 384- 孔实验板中，振荡混匀。室温暗处孵育30分钟。

3) 可以在加入ADP检测试剂后30-60分钟读取荧光信号。由于荧光信号非常稳定，如有需要，可以在加入检测试剂后3小时内读板。