1. 细胞准备
1) 在96孔或384孔白色细胞培养板铺合适密度的细胞。
2) 根据实验设定,细胞孵育一定时间后将合适浓度的待检测化合物加到细胞板孔中。建议设置只加溶剂载体的细胞对照(阴性对照)和只加溶剂载体的细胞培养基对照(空白对照)(说明详见 五. 注意事项 4)。
3) 根据实验需求继续培养合适的时间诱导细胞凋亡。
2. NBA-GloTM Caspases 3/7 细胞凋亡检测
1) 取出NBA-GloTM Caspases 3/7 细胞凋亡检测试剂,在室温平衡20分钟。轻摇混匀。
2) 取出待测细胞培养板,在室温平衡20分钟。
3) 加50 µl 的检测试剂到 100 µl 96孔板细胞中, 或10 µl 试剂到20 µl 384 孔板细胞中,振板2分钟,放置暗处室温孵育30-60min 。荧光信号一般在加入检测试剂1hr 左右达到最大值。最早可以在加入检测试剂后30min读板, 最晚不要超过3hr。
4) 在荧光读板机上读取荧光信号。