1. 在96孔或384孔细胞培养板铺合适密度的待检测细胞,转染合适质粒或带有相关双荧光素酶表达载体的稳定细胞株。建议使用白板。
2. 根据项目需求对细胞进行相关处理,并继续培养合适的时间。
3. 取出检测缓冲液及底物,在室温平衡20分钟。
4. 取出待测细胞培养板,在室温平衡20分钟。
5. 准备检测试剂,R1试剂可以直接使用。R2底物为100x 浓缩液,使用前用R2缓冲液配成R2 1x工作液。注意避光。
6. R1试剂的用量是实际细胞培养液体积的1/2,加完后轻轻振荡2分钟,放置暗处继续裂解5~8分钟。
7. 在luminescence读板仪上读取荧光信号。此为萤火虫荧光素酶活性读数。保存数据。
8. R2试剂的用量是原培养孔实际细胞培养液体积的等体积,加完成轻轻振荡2分钟。
9. 在luminescence读板仪上读取荧光信号。此为海肾荧光素酶活性读数。保存数据。
10. 进行数据处理分析。