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NBA-Glo™微分裂荧光素酶裂解型检测试剂盒

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目录号 规格 价格
L2001 10 ml 询价
L2002 100 ml 询价
L2003 10x100 ml 询价
产品描述

微分裂荧光素酶技术(Nano-luc split enzyme technology)将荧光素酶蛋白分子分成两个不同的片段,分别表达,两个片段具有高亲和力,在同一反应体系中可以快速自动结合生成具有荧光素酶活性的完整的酶分子。检测微分裂荧光素酶活性可以用于细胞内目标蛋白的表达水平,相互作用,动态变化等研究。微分裂荧光素酶裂解型检测试剂盒(Nano-luc Lytic Detection System)提供细胞裂解缓冲液,反应底物,而反应体系的分裂荧光素酶小片段则克隆在表达载体上,并与目标蛋白表达在同一分子上,作为目标蛋白分子的标签。带分裂荧光素酶小片段标签的目标蛋白表达载体由用户构建,制备,并完成对细胞的转染。

产品特性

·高稳定性

产品-20℃或以下储存3个月,-80℃或以下储存12个月荧光素酶保持 > 90%的活性。

·高信号强度

HEK293细胞转染分裂酶小片段标签质粒,0.2mg DNA每个96孔板反应孔,48小时后检测,荧光信号读值通常能到千万级。

·高灵敏度,反应窗口大

反应本底低,与转染细胞孔信号相差2-3个数量级。在低至100个细胞时,读数依然比对照高出3倍以上。

·适合于高通量检测

荧光信号半衰期较长,荧光强度在2小时内保持相对稳定,满足一次同时进行大批量的微孔板实验需求。

实验步骤

1. 96孔或384孔细胞培养板铺合适密度的待检测细胞,转染合适的带分裂酶小片段的质粒或带有相关表达载体的稳定细胞株。建议使用白板。

2. 根据项目需求对细胞进行相关处理,并继续培养合适的时间。

3. 取出检测裂解缓冲液,在室温平衡20分钟。快速spin 底物管及分裂酶大片段(用户自供,使用浓度需优化)10秒钟,将内容物收集于管底,放置在冰盒上。

4. 取出待测细胞培养板,在室温平衡20分钟

5. 准备检测试剂:根据实验需求确定配制的试剂量。配制时先将底物加到裂解缓冲液中,充分混匀,再加入分裂酶大片段(用户自供),充分混匀。底物是100x,建议分裂酶大片段浓度为50x,使用前用裂解缓冲液稀释成1x的检测工作液。注意避光。

6. 等体积1x检测工作液到96或  384 孔板细胞中,轻轻振荡30秒钟,放置暗处继续裂解35分钟。

7. luminescence读板仪上读取荧光信号保存数据,进行数据处理分析。

8. 未使用完的试剂放回-20℃冰箱保存。

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