1. 在96孔或384孔细胞培养板铺合适密度的待检测细胞,转染合适的带分裂酶小片段的质粒或带有相关表达载体的稳定细胞株。建议使用白板。
2. 根据项目需求对细胞进行相关处理,并继续培养合适的时间。
3. 取出检测裂解缓冲液,在室温平衡20分钟。快速spin 底物管及分裂酶大片段(用户自供,使用浓度需优化)10秒钟,将内容物收集于管底,放置在冰盒上。
4. 取出待测细胞培养板,在室温平衡20分钟。
5. 准备检测试剂:根据实验需求确定配制的试剂量。配制时先将底物加到裂解缓冲液中,充分混匀,再加入分裂酶大片段(用户自供),充分混匀。底物是100x,建议分裂酶大片段浓度为50x,使用前用裂解缓冲液稀释成1x的检测工作液。注意避光。
6. 加等体积1x检测工作液到96或 384 孔板细胞中,轻轻振荡30秒钟,放置暗处继续裂解3~5分钟。
7. 在luminescence读板仪上读取荧光信号。保存数据,进行数据处理分析。
8. 未使用完的试剂放回-20℃冰箱保存。