1. 根据实验设计,将THP1-Dual细胞(或其它带分泌型Luci/Gaussia荧光素酶报告基因的细胞)铺于96孔或384孔反应板。
2. 根据实验要求对细胞进行化合物处理及报告基因刺激。
3. 于报告基因刺激后24~48小时收集细胞上清液,进行荧光素酶活性分析。
4. 实验前将QT-LucTM 4 Luci/Gaussia荧光素酶检测试剂平衡至室温,轻摇混匀。
5. 根据需要量配制对应体积的1x反应液。试剂盒中的底物为100x,使用前用缓冲液配成1x反应液。
6. 向96孔孔白色不透板每孔加入20 ml检测样本或对照样本,再向各孔加入50 ml检测试剂。
7. 在振板机上振荡20秒钟。
8. 在luminescence读板仪上读取并记录荧光信号。