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MycoTest™巢式PCR支原体检测试剂盒

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目录号 规格 价格
M1001 25 T 询价
M1002 50 T 询价
产品描述

MycoTestTM巢式PCR支原体检测试剂盒用于定检测细胞培养的支原体污染95%以上的细胞培养中的支原体污染是由Mycoplasma fermentansM. orale M. pirum M. hyorhinis M. hominis,, M. salivariu M. arginine Acholeplasma laidlawii支原体所导致。试剂盒通过巢式PCR方法扩增细胞培养基中包括以上八种和其他多种常见支原体的保守基因片段从而判断是否存在支原体污染该试剂具有快速,灵敏度高和特异性高的特点。每个反应能够检测到低至10个支原体基因数,特别是对Acholeplasma laidlawii支原体的检测灵敏度有很大的提高,并且和细菌或培养细胞无交叉反应

产品特性

·高灵敏度

产品灵敏度达到10cfu/ml

·高特异性

实验步骤

1. 待测细胞培养基准备

1) 从对数生长期的细胞培养中取1mL细胞培养基。

2) 细胞培养基室温离心 200 g 5分钟。将大约800 μL培养基转到新的离心管中,注意不要带入离下的细胞碎片

3) 用以上准备的细胞培养基作为巢式PCR的模板进行支原体检测。

 

2. 巢式PCR反应

1) 第一PCR反应:以通用的2X PCR 预混液试剂为例:

PCR反应组装(推荐冰上配制)

组分

体积(μL)

2xPCR Mix

25

1st PCR 引物P1

2 

模板(细胞培养基)

1

PCR反应内参

2

加无菌超纯水至

50

 

PCR反应条件: 30循环,条件见下表

步骤

温度

时间

循环数

预变性

94℃

5min

1

变性

94℃

30s

30

退火

55℃

30s

30

延伸

72℃

40s

 

30

终延伸

72℃

5min

1

 

2) 第一PCR反应中取1μL 作为第二PCR的模板并用引物P2进行第二PCR。第二PCR反应组装(推荐冰上配制)见下表。PCR反应条件同第一PCR反应

组分

体积(μL)

2xPCR Mix

25

2nd  PCR 引物P2

2 

模板(1st PCR产物)

1

加无菌超纯水至

50

 

3) 准备2% 的琼脂糖胶。取10 µl 的第二PCR产物做DNA电泳。

 

3. 结果

PCR反应内参为515 bp单一DNA条带,常见支原体污染会产生236 bp-365 bp单一DNA条带,Acholeplasma laidlawii 污染会产生426 bp 219bp的双DNA条带。

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