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NBA-Glo™微分裂荧光素酶活细胞内检测试剂盒

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产品描述

微分裂荧光素酶技术(Nano-luc split enzyme technology)将荧光素酶蛋白分子分成两个不同的片段,分别表达,两个片段具有高亲和力,在同一反应体系中可以快速自动生成具有荧光素酶活性的完整的酶分子。活细胞微分裂荧光素酶检测试剂盒(Nano-luc live cell detection kit)提供可以进入细胞的反应底物,而反应体系的两个酶片段分别克隆在两个表达载体上,并分别与两个目标蛋白表达在同一分子上,作为两个目标蛋白分子的标签。检测载体共转染后的细胞的荧光素酶活性可以用于细胞内两个目标蛋白的表达水平,相互作用,动态变化等研究

 

产品特性

·高稳定性

产品-20℃或以下储存12个月,-80℃或以下储存12个月荧光素酶保持 > 90%的活性。

·高信号强度

HEK293细胞共转染带分裂酶大小片段标签的双质粒,0.2mg DNA每个96孔板反应孔,48小时后检测,荧光信号读值通常能到千万级。

·使用便捷

反应本底低,检测信号高于无细胞对照2-3个数量级。

·适合于高通量检测

荧光信号半衰期较长,荧光强度在1-2小时内保持相对稳定,满足一次同时进行大批量的微孔板实验需求。

实验步骤

1. 96孔或384孔细胞培养板铺合适密度的待检测细胞,转染合适质粒或带有分裂荧光素酶大小片段标签的目标蛋白表达载体的稳定细胞株。建议使用白板。

2. 根据项目需求对细胞进行相关处理,并继续培养合适的时间。

3. 取出检测缓冲液,在室温平衡20分钟。快速spin 底物管10秒钟,将内容物收集于管底,放置在冰盒上。

4. 取出待测细胞培养板,在室温平衡20分钟

5. 准备检测试剂:建议30 µl 的检测试剂到 96孔板细胞中, 或10 µl 试剂到384 孔板细胞中。根据实验需求确定配制的试剂量。配制时将底物加到裂解缓冲液中,充分混匀。试剂盒中底物是100x,使用前用缓冲液稀释成1x的检测工作液。注意避光。

6. 吸去检测孔细胞培养液,30 µl 的1x检测工作液 每个96孔板检测孔, 或10 µl 试剂到每个384 孔板检测孔,轻轻振荡15秒。如果是悬浮细胞,需要将反应板离心后,小心吸去培养液,然后再加入1x检测工作液。

7. luminescence读板仪上读取荧光信号保存数据。进行数据处理分析。

8. 未使用完的试剂放回-20℃冰箱保存。

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