1. 在96孔或384孔细胞培养板铺合适密度的待检测细胞,转染合适质粒或带有分裂荧光素酶大小片段标签的目标蛋白表达载体的稳定细胞株。建议使用白板。
2. 根据项目需求对细胞进行相关处理,并继续培养合适的时间。
3. 取出检测缓冲液,在室温平衡20分钟。快速spin 底物管10秒钟,将内容物收集于管底,放置在冰盒上。
4. 取出待测细胞培养板,在室温平衡20分钟。
5. 准备检测试剂:建议加30 µl 的检测试剂到 96孔板细胞中, 或10 µl 试剂到384 孔板细胞中。根据实验需求确定配制的试剂量。配制时将底物加到裂解缓冲液中,充分混匀。试剂盒中底物是100x,使用前用缓冲液稀释成1x的检测工作液。注意避光。
6. 吸去检测孔细胞培养液,加入30 µl 的1x检测工作液到 每个96孔板检测孔中, 或10 µl 试剂到每个384 孔板检测孔中,轻轻振荡15秒钟。如果是悬浮细胞,需要将反应板离心后,小心吸去培养液,然后再加入1x检测工作液。
7. 在luminescence读板仪上读取荧光信号。保存数据。进行数据处理分析。
8. 未使用完的试剂放回-20℃冰箱保存。